傳統(tǒng)酶標(biāo)儀是指具備吸收光檢測(cè)功能的酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展和市場(chǎng)需求不斷豐富，如今酶標(biāo)儀所具備的檢測(cè)功能日益豐富。接下來(lái)，由筆者帶大家快速了解酶標(biāo)儀的各種檢測(cè)技術(shù)。
酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，酶標(biāo)儀檢測(cè)技術(shù)是一種高通量微孔板檢測(cè)技術(shù)，操作簡(jiǎn)便，被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、生物制藥、體外診斷、食品安全、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域。
傳統(tǒng)酶標(biāo)儀是指具備吸收光檢測(cè)功能的酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展和市場(chǎng)需求不斷豐富，如今酶標(biāo)儀所具備的檢測(cè)功能日益豐富，在吸收光檢測(cè)(Abs)基礎(chǔ)上增加了熒光強(qiáng)度(FI)、發(fā)光檢測(cè)(Lum)、熒光偏振(FP)、時(shí)間分辨熒光(TRF)、勻相時(shí)間分辨熒光(HTRF)以及Alpha檢測(cè)等多種檢測(cè)技術(shù)。然而每一種技術(shù)都具有獨(dú)特的應(yīng)用價(jià)值和局限性，筆者將主流的酶標(biāo)儀檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行匯總，分為上、下兩篇，以饗讀者。
1、吸收光檢測(cè)（Absorbance,Abs）
中國(guó)自主創(chuàng)新能力正在不斷提升，科技創(chuàng)新成為推動(dòng)國(guó)家經(jīng)濟(jì)發(fā)展和國(guó)際競(jìng)早期的酶標(biāo)儀實(shí)際上是一臺(tái)變相的專用光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，其工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同，在特定波長(zhǎng)下檢測(cè)到的被測(cè)物的吸光值。光通過(guò)被檢測(cè)物前后的能量差異即為被檢測(cè)物吸收掉的能量，特定波長(zhǎng)下，同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系，即符合朗伯比爾定律。
檢測(cè)時(shí)，光波由光源燈發(fā)射并經(jīng)過(guò)濾光片或單色器變成一束單色光，照射到微孔板中的待測(cè)樣本，一部分光被樣本吸收，另一部分則透過(guò)樣本照射到光電檢測(cè)器上，光電檢測(cè)器將不同待測(cè)樣本的強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)電信號(hào)，再經(jīng)信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算，最后由顯示器顯示結(jié)果。

典型應(yīng)用：核酸和蛋白質(zhì)定量、ELISA、酶學(xué)檢測(cè)、細(xì)菌生長(zhǎng)OD600測(cè)定、LAL內(nèi)毒素檢測(cè)、MMT/CCK8等細(xì)胞活力分析。

2、熒光強(qiáng)度（Fluorescence Intensity,FI）
熒光是發(fā)光體分子中處于激發(fā)態(tài)的原子核外電子由高能級(jí)回到低能級(jí)所產(chǎn)生的輻射，因此是冷光。熒光的顏色多為藍(lán)色、綠色、紅色和黃色等。熒光強(qiáng)度即發(fā)射熒光的光量子數(shù)，熒光強(qiáng)度與溶液吸收光強(qiáng)度，熒光量子效率以及周圍環(huán)境等因素有關(guān)。當(dāng)其他因素保持不變，熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)溶液的濃度成正比，這也是熒光檢測(cè)的定量依據(jù)。
熒光酶標(biāo)儀通常包含光源、用于選擇激發(fā)光的光學(xué)系統(tǒng)（即濾光片和/或光柵）、用于選擇發(fā)射光的第二光學(xué)系統(tǒng)以及檢測(cè)器。檢測(cè)時(shí)，采用特定波長(zhǎng)激發(fā)光來(lái)激發(fā)樣品孔內(nèi)的熒光標(biāo)志物，通過(guò)檢測(cè)器檢測(cè)熒光物質(zhì)被激發(fā)產(chǎn)生的發(fā)生光。

典型應(yīng)用：核酸等生物大分子定量、酶活性分析、熒光免疫分析、細(xì)胞學(xué)分析（細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒理、細(xì)胞吸附等）、胞內(nèi)鈣離子濃度的變化、熒光蛋白的報(bào)道基因分析 (GFP)、細(xì)胞凋亡等。

3、發(fā)光檢測(cè)（Luminescence,Lum）
光檢測(cè)包括化學(xué)發(fā)光和生物發(fā)光，是樣本孔內(nèi)發(fā)生的化學(xué)、生化或者酶反應(yīng)發(fā)出的光信號(hào)。與吸收光和熒光檢測(cè)不同的是，發(fā)光檢測(cè)不需要激發(fā)光源，這就使得發(fā)光更敏感，更不容易引起背景噪音。
化學(xué)發(fā)光是由化學(xué)反應(yīng)引起的一種特殊的發(fā)光現(xiàn)象，即通過(guò)氧化還原反應(yīng)釋放的能量將體系中某一物質(zhì)從基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)，隨后以輻射發(fā)光（紫外光、可見(jiàn)光或近紅外光）的形式返回基態(tài)釋放能量?；瘜W(xué)發(fā)光由化學(xué)激發(fā)過(guò)程和發(fā)光過(guò)程兩部分組成。根據(jù)能量作用過(guò)程，化學(xué)發(fā)光主要分為直接發(fā)光和間接發(fā)光兩類。
生物發(fā)光是生物體內(nèi)的發(fā)光蛋白通過(guò)消耗能量物質(zhì)而產(chǎn)生的發(fā)光現(xiàn)象，其特點(diǎn)是只消耗能量物質(zhì),不消耗發(fā)光物質(zhì)。生物發(fā)光屬于冷光范疇,即發(fā)光不是由于發(fā)光體溫度升高所致,發(fā)射波長(zhǎng)也與其溫度無(wú)關(guān)。目前被發(fā)現(xiàn)的生物發(fā)光底物有蟲(chóng)熒光素、腔腸素、蝦素等。

典型應(yīng)用：?jiǎn)?雙熒光素酶報(bào)告基因、BRET、細(xì)胞活力檢測(cè)、細(xì)胞增殖檢測(cè)、支原體檢測(cè)、細(xì)胞毒性檢測(cè)、ATP、dsDNA、水母發(fā)光蛋白Ca2+、基于化學(xué)發(fā)光的ELISA檢測(cè)等。

4、熒光偏振（Fluorescence polarization,FP）
1926年，Perrin首先描述了熒光偏振理論，以單一波長(zhǎng)偏振光照射溶液中的熒光物質(zhì)，當(dāng)熒光分子受平面偏振光激發(fā)時(shí)，如果分子在受激發(fā)時(shí)期（對(duì)于熒光素約持續(xù)4納秒）保持靜止，發(fā)射光將位于同樣的偏振光平面；如果在受激發(fā)時(shí)期，分子旋轉(zhuǎn)或翻轉(zhuǎn)偏離這一平面，發(fā)射光將位于與激發(fā)光不同的偏振面，即熒光的去偏振現(xiàn)象。
熒光偏振檢測(cè)技術(shù)通過(guò)分析體系中熒光分子的偏振信號(hào)變化差異，實(shí)現(xiàn)對(duì)分子間相互作用的研究以及所選目標(biāo)物的檢測(cè)，其計(jì)算依據(jù)為熒光偏振光強(qiáng)度與待檢測(cè)物質(zhì)含量呈正相關(guān)性。
檢測(cè)時(shí)，熒光物質(zhì)標(biāo)記在特定物質(zhì)上使原本微弱的反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)化成較強(qiáng)的熒光信號(hào)，起到信號(hào)增強(qiáng)的作用。與此同時(shí)，在檢測(cè)系統(tǒng)中加上起偏器和檢偏器，當(dāng)從光源發(fā)出的一束光線經(jīng)垂直起偏器后成為垂直偏振光，樣品被垂直偏振光激發(fā)而產(chǎn)生偏振熒光，此熒光經(jīng)檢偏器后可測(cè)出與樣品濃度有關(guān)的水平或垂直方向的熒光偏振光強(qiáng)度。
典型應(yīng)用：受體/配體研究（如激素/受體檢測(cè)），蛋白質(zhì)/多肽相互作用，DNA/蛋白質(zhì)相互作用，酪氨酸激酶檢測(cè)，競(jìng)爭(zhēng)性免疫檢測(cè)、單核苷酸多態(tài)性篩選、實(shí)時(shí)定量PCR-FP、體外細(xì)胞損失檢測(cè)等。
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