干貨 | 高效液相色譜法（HPLC）復(fù)核細(xì)則

一、對(duì)起草單位的要求

1．HPLC法用于藥品的有關(guān)物質(zhì)檢查或含量測(cè)定時(shí)，需提供建立HPLC法的依據(jù)及參考文獻(xiàn)。

2．應(yīng)對(duì)建立的方法進(jìn)行論證，按照中國(guó)藥典2000年版二部凡例與附錄收載的藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證項(xiàng)下所列的要求進(jìn)行試驗(yàn)。

3．建立方法時(shí)，應(yīng)考慮下列事項(xiàng)：

①首選填料為十八烷基鍵合硅膠，并至少對(duì)兩根不同品牌的色譜柱進(jìn)行比較試驗(yàn)，其中一根為國(guó)產(chǎn)柱。

②流動(dòng)相首選甲醇-水系統(tǒng)，應(yīng)盡可能少用含有緩沖液的流動(dòng)相，如為堿性藥物，流動(dòng)相的pH值應(yīng)為7~8；如為酸性藥物，流動(dòng)相的pH值應(yīng)為3~4。

③盡可能選用流動(dòng)相作為溶劑，如未能選用，應(yīng)說(shuō)明原因。

④內(nèi)標(biāo)物應(yīng)首選易得到的純度較高的化學(xué)試劑或?qū)φ掌?，?yīng)與待測(cè)物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)相似，理化性質(zhì)接近，峰的響應(yīng)值相當(dāng)，以及分離度應(yīng)大于1.5，另應(yīng)考慮對(duì)照品的來(lái)源問(wèn)題。

⑤檢測(cè)器首選UV檢測(cè)器。

4．采用HPLC法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)，如雜質(zhì)峰的響應(yīng)值與主成分峰的響應(yīng)值相差太大，應(yīng)首選自身對(duì)照法，而不宜選用面積歸一化法。

5．HPLC法用于原料藥的含量測(cè)定。如以?xún)?nèi)標(biāo)法測(cè)定含量，應(yīng)考慮內(nèi)標(biāo)物是否含有干擾供試品的雜質(zhì)；如以外標(biāo)法測(cè)定含量，對(duì)照品與供試品應(yīng)各取樣2份，對(duì)照晶溶液各進(jìn)樣3次，供試品溶液各進(jìn)樣2次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD應(yīng)不得大于l.5％）。

二、對(duì)復(fù)核單位的要求

1．按照起草單位提供的色譜條件與方法進(jìn)行復(fù)核。

2．當(dāng)HPLC法用于有關(guān)物質(zhì)的檢查時(shí)，應(yīng)進(jìn)行最低檢出量試驗(yàn)。

3．應(yīng)考慮對(duì)同一樣品分析結(jié)果的重現(xiàn)程度、方法的可行性，并作出評(píng)價(jià)。

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