一、 HPLC試劑要求

甲醇，乙腈必須為色譜級純及以上級別，其他試劑也盡量使用色譜級純，試劑標簽上都會標有HPLC字樣。水為超純水或者購買商品化的的純凈水例如屈臣氏。

二、流動相配制注意事項

一般來說，溶劑的混合通常按體積比（V/V）。

體積混合有三種方式，例如95%乙腈水溶液：

方式1：可以用量筒量取乙腈950ml，再量取水50ml，兩種液體在瓶內充分搖晃混合。

方式2：可以先取950ml乙腈到1L容量瓶中然后用水定容。

方式3：可以先取50ml水到1L容量瓶中然后用乙腈定容。

這三種方式配置得到的流動相組成都是不同的，即使不考慮其他方面因素，保留時間也不會相同。一般情況推薦使用方式1 來配置流動相。

一、 HPLC試劑要求

甲醇，乙腈必須為色譜級純及以上級別，其他試劑也盡量使用色譜級純，試劑標簽上都會標有HPLC字樣。水為超純水或者購買商品化的的純凈水例如屈臣氏。

二、流動相配制注意事項

一般來說，溶劑的混合通常按體積比（V/V）。

體積混合有三種方式，例如95%乙腈水溶液：

方式1：可以用量筒量取乙腈950ml，再量取水50ml，兩種液體在瓶內充分搖晃混合。

方式2：可以先取950ml乙腈到1L容量瓶中然后用水定容。

方式3：可以先取50ml水到1L容量瓶中然后用乙腈定容。

這三種方式配置得到的流動相組成都是不同的，即使不考慮其他方面因素，保留時間也不會相同。一般情況推薦使用方式1 來配置流動相。

三、含緩沖鹽流動相的配制需注意的事項

配制緩沖鹽所使用的鹽試劑需為色譜純，稱樣需選擇量程適宜的天平且每天使用前對天平校正。流動相需過0.45μm或0.22μm濾膜過濾并超聲脫氣20min以上。若配有在線脫氣機可適當減少脫氣時間。

注意：不得將裝流動相的容器直接放置與超聲儀內（容易破碎），需放與篩網(wǎng)上進行超聲。

四、調節(jié)流動相pH值

采用反相色譜法分離弱酸（3≤pKa≤7）或弱堿（7≤pKa≤8）樣品時，調節(jié)流動相的pH值的目的是為抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善樣品的峰形。

（1）對于弱酸樣品，流動相的pH值越小，組分的k值越大，當pH值遠遠小于弱酸的pKa值時，弱酸主要以分子形式存在；分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液。

（2）對于弱堿樣品，情況相反。分析弱堿樣品時，通常在流動相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。流動相中加入有機胺可以減弱堿性溶質與殘余硅醇基的強相互作用，減輕或消除峰拖尾現(xiàn)象。所以在這種情況下有機胺（如三乙胺）也被稱為除尾劑或者減尾劑。

五、流動相的使用注意事項

1）所用流動相必須預先濾過和脫氣，流動相一般貯存于玻璃容器內。貯存容器一定要蓋嚴，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化；

2）磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉，應盡量現(xiàn)配現(xiàn)用，不要長期貯存；

3）容器應定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質沉淀和可能生長的微生物；

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