高溫滅菌是指用熱能殺死微生物。其原理是高溫使原生質(zhì)中的蛋白質(zhì)變性、使酶失活，致使微生物死亡。高溫滅菌主要有高壓蒸汽滅菌法、干熱滅菌法和灼燒滅菌法幾種。如果操作不當(dāng)，即達不到預(yù)期的滅菌效果?，F(xiàn)就常見錯誤分析如下。

一、高壓蒸汽滅菌

蒸汽滅菌屬濕熱滅菌，由于濕熱滅菌有潛能存在，被滅菌物體的溫度比蒸汽的低，蒸汽在其表面凝結(jié)成水，放出潛能，可迅速提高被滅菌物體的溫度。又由于水和水蒸汽比空氣的熱容量大、導(dǎo)熱快、穿透力強，所以，與干熱滅菌相比，滅菌需要的溫度低、時間短。由于高壓蒸汽滅菌法水蒸汽的溫度隨其所受壓力的增加而升高，因而滅菌用的高溫蒸汽都是通過加壓獲得的。

手提式高壓滅菌鍋操作中常見的錯誤有：

（1）排氣不徹底。

在升壓前應(yīng)將鍋內(nèi)冷空氣排凈，因空氣是熱不良導(dǎo)體，若不排凈，冷空氣就會聚集井滯留在滅菌鍋中消毒筒的中下部，圍繞在待滅菌物的周圍。在這種情況下，假若鍋內(nèi)僅排除一半空氣，當(dāng)壓力表指針達到105Pa時，鍋內(nèi)實際溫度僅能達到 112℃，比要求的 121℃低9℃之多，將導(dǎo)致滅菌不徹底，可能造成大面積染菌。（自動的高壓滅菌鍋 上下排氣閥 都要打開 然后加熱 排空氣）

（2）排氣軟管沒有按要求插入滅菌筒的下部，或排氣軟管斷裂、缺失。

滅菌鍋內(nèi)的冷空氣是通過排氣軟管排出的，上述情況將造成滅菌筒外的蒸汽直接經(jīng)排氣閥排出鍋外，滅菌鍋內(nèi)的空氣排放受阻。

（3）消毒筒內(nèi)物品堆積太緊、太滿。

阻礙蒸汽的流通和熱交換，使容器內(nèi)升溫減慢，造成物體內(nèi)部殺菌不完全。

（4）升溫過快。

滅菌的時間是以達到要求溫度后的持續(xù)時間計算的，但溫度的升降過程同樣起到殺菌的作用，升降溫度過快會通過影響總的積溫而影響滅菌效果。另外，升溫過快，特別是使用外源蒸汽的情況下，會造成被滅菌物體內(nèi)部升溫滯后于壓力表指示溫度。

（5）滅菌的物體體積（容量）過大。

組織培養(yǎng)中或常規(guī)微生物實驗中，高溫蒸汽滅菌通常要在 121℃（即蒸汽壓力為1kg／cm2或 15磅／寸2，或0.105MPa）下保溫15min。這一規(guī)定僅適用于試管、三角瓶中小于200ml容量的。若體積太大，特別是固體培養(yǎng)基，會造成滅菌不徹底，應(yīng)適當(dāng)延長滅菌時間。

（6）任意延長滅菌時間。

規(guī)定的滅菌溫度和時間是經(jīng)過科學(xué)試驗確定的，只要按照正確的滅菌程序是能達到滅菌目的的。但在實踐中常有人為了“保證徹底滅菌”而任意延長滅菌時間。這樣忽視了殺菌過程中溫度對培養(yǎng)基成分的破壞作用，是得不償失的。

（7）溫度不穩(wěn)定。

滅菌過程中溫度（壓力）忽高忽低，特別是手提式電能滅菌鍋，它沒有控溫裝置，難于控溫。操作者可配置調(diào)壓變壓器，通過調(diào)節(jié)電壓控溫。此外，還常遇到滅菌鍋內(nèi)加水太少（應(yīng)加 2～3L）；容器內(nèi)裝的溶液量過多（應(yīng)少于2／3）；安全閥失靈等問題。

二、 干熱滅菌

干熱滅菌指在烘箱160℃溫度下，維持 2h，消除物體上的微生物的方法。常見錯誤有：

（1）將滅菌物品（如培養(yǎng)皿）堆摞放置，且堆得過滿、過擠，阻礙空氣流通和熱量的傳遞、交換；

（2）升溫時不打開箱頂通風(fēng)孔，影響箱內(nèi)冷空氣及水汽的排除；

（3）高溫（80℃以上）下開箱取物，熱蒸汽噴出造成燒傷及突然降溫，使玻璃器皿破裂；

（4）溫度過高（180℃以上）造成包裝紙、棉塞焦化，失去防菌或過濾作用；

（5）將不耐熱的槍頭、離心管、試管帽、濾器等塑料制品放入烤箱內(nèi)滅菌，而致熔化。

三、灼燒滅菌

即直接利用火焰將微生物灼燒致死。特點：簡便、迅速、徹底。主要用于接種工具及器皿的滅菌。如接種杯、鑷子、剪刀、玻棒、瓶口及其封口用的鋁箔的滅菌常見的錯誤有：

（1）接種工具的滅菌范圍不夠，如長度不夠，灼燒時沒有旋轉(zhuǎn)造成內(nèi)外側(cè)滅菌不勻；

（2）接種工具沒有降至常溫即用于接種；

（3）對玻璃器皿灼燒過度，使棉塞、封口膜焦化或熔化

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