高效液相色譜儀常用檢測器--蒸發(fā)光散射檢測器

蒸發(fā)光散射檢測器（evaporative light—scattering detector，ELSD）是20世紀(jì)90年代出現(xiàn)的新型通用型質(zhì)量檢測器，它適用于檢測揮發(fā)性低于流動(dòng)相的組分，主要用于檢測糖類、高級(jí)脂肪酸、磷脂、維生素、氨基酸、甘油三酯及甾體等，并在沒有標(biāo)準(zhǔn)品和化合物結(jié)構(gòu)參數(shù)未知的情況下檢測未知化合物。對(duì)各物質(zhì)有幾乎相同的響應(yīng)，但是其靈敏度比較低，尤其是有紫外吸收的組分。此外流動(dòng)相必須是揮發(fā)性的，不能含有緩沖鹽等。它的通用檢測原理克服了常見于液相色譜傳統(tǒng)檢測方法的不足，已越來越多地應(yīng)用于HPLC、超臨界色譜和逆流色譜中。不同于紫外和熒光檢測器，ELSD的響應(yīng)不依賴于樣品的光學(xué)特性，任何揮發(fā)性低于流動(dòng)相的樣品均能被檢測，不受其官能團(tuán)的影響。靈敏度比示差折光檢測器高，對(duì)溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，適合與梯度洗脫液相色譜聯(lián)用。

（1）液相色譜ELSD檢測原理

ELSD運(yùn)行有三個(gè)過程：第一是霧化過程，用惰性氣體或凈化空氣將色譜柱流出物霧化；第二是蒸發(fā)過程，在一個(gè)加熱管（漂移管）中將流動(dòng)相揮發(fā)；第三是檢測過程，測定留下來的樣品顆粒的光散射。所有商品ELSD都由一種或兩種模式完成這三個(gè)過程。模式A的操作是全部柱流出物（氣溶膠）都進(jìn)入直的漂移管，讓流動(dòng)相在其中蒸發(fā)，模式B中是將氣溶膠通過一個(gè)彎管，在此管中大的顆粒沉積下來流入廢氣管，其余的小顆粒進(jìn)入螺旋狀的漂移管，在上述兩種模式中，樣品顆粒均進(jìn)入光管，使激光發(fā)生散射而得以檢測。

（2）液相色譜ELSD檢測的優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)：

①具有較好的通用性，任何揮發(fā)性低于流動(dòng)相的樣品均能被檢測；

②在相同色譜條件下，物理性質(zhì)相似的物質(zhì)可給出一致的響應(yīng)；

③能與梯度洗脫方式相容;

④靈敏度高于示差折光檢測器、紫外末端吸收檢測法。

⑤在ELSD上開發(fā)的實(shí)驗(yàn)方法移植到質(zhì)譜上則無需修改。

ELSD檢測的不足之處主要是：

①靈敏度不夠理想；

②流動(dòng)相的選擇受限；

③某些樣品線性范圍較窄等。

（3）影響液相色譜ELSD檢測性能的基本因素

①操作模式選擇，選擇合適的操作模式可提高方法的靈敏度，操作模式的選擇取決于樣品的揮發(fā)性、流動(dòng)相的組成及其流速。

②流動(dòng)相組成及流速選擇，流動(dòng)相的揮發(fā)性越好，方法的靈敏度越高。流動(dòng)相的流速越低，相應(yīng)的信號(hào)越強(qiáng)。

③漂移管溫度對(duì)基線水平和噪音的影響并無明顯規(guī)律性。最優(yōu)溫度應(yīng)為在流動(dòng)相基本揮發(fā)基礎(chǔ)上，產(chǎn)生可接受噪音的最低溫度。

④載氣流速是影響檢測性能的一個(gè)很重要因素。最優(yōu)載氣流速應(yīng)是在可接受噪音的基礎(chǔ)上（例如0.5mV），產(chǎn)生最大檢測響應(yīng)值時(shí)的最低流速。

（4）液相色譜ELSD檢測時(shí)的數(shù)據(jù)處理模式

ELSD檢測最常采用的數(shù)學(xué)模型是lgy=algx+b （y為響應(yīng)值，x為進(jìn)樣量或樣品濃度，a、b為回歸常數(shù)），也有采用二次曲線模型的（y=ax2+bx+c）。由于響應(yīng)值（y）與進(jìn)樣量（x）之間并非線性關(guān)系，故其數(shù)據(jù)處理不同于紫外檢測方法。ELSD測定已知物質(zhì)的含量時(shí)，一般應(yīng)用隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線法而非外標(biāo)法，因?yàn)樾Ｕ€性方程的截距并不為零。新藥基準(zhǔn)品的建立，除了對(duì)照品為另外一種含量已知、結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)外，數(shù)據(jù)處理方式同上相似。ELSD測定物質(zhì)純度時(shí)，由于響應(yīng)值與進(jìn)樣量間并非線性關(guān)系，多通過繪制其中的一種或數(shù)種物質(zhì)的隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線來加以校正。多組分物質(zhì)的分析，除了隨行校正曲線的線性范圍有所區(qū)別外，數(shù)據(jù)處理同上類似。盡管存在一些不足之處，但是ELSD作為一種新型的通用型質(zhì)量檢測器，具有許多獨(dú)特的優(yōu)勢，例如它的通用性，響應(yīng)因子的一致性以及與梯度洗脫相容等，將在無特征紫外吸收物質(zhì)的分析方面發(fā)揮越來越重要的作用。

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