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正相色譜柱
1. 用四氫呋喃沖洗
2. 用甲醇沖洗
3. 用四氫呋喃沖洗
4. 用二氯甲烷沖洗
5. 用無苯正己烷沖洗
反相色譜柱
1. 用 HPLC 級水沖洗,在沖洗過程中注入4等分共 200μL 的 DMSO
2. 用甲醇沖洗
3. 用氯仿沖洗
4. 用甲醇沖洗
陰離子交換色譜柱
1. 用 HPLC 級水沖洗
2. 用 50mM 到 1M 的適當緩沖液進行梯度沖洗
3. 用 HPLC 級水沖洗
4. 用甲醇沖洗
5. 用氯仿沖洗
陽離子交換色譜柱
1. 用HPLC級水沖洗,在沖洗過程中注入 4 等分共 200μL 的 DMSO
2. 用四氫呋喃沖洗
蛋白體積排阻色譜柱
從蛋白體積排阻填料中移除污染物有兩種清洗/再生方法
弱保留蛋白
1. 用30mL 0.1M 磷酸鹽緩沖液 (pH 3.0) 沖洗
強保留蛋白
2. 用 100% 水到 100% 乙腈梯度沖洗60分鐘
多孔石墨碳色譜柱
多孔石墨碳有四種清洗或再生方法。使用哪種方法取決于分析物以及對應的流動相
1.酸/堿清洗:用水相比例較高的流動相分析離子化合物時
1.1 反接色譜柱
1.2 用 50mL 包含 0.1% 三氟乙酸的四氫呋喃:水 (1:1) 溶液沖洗
1.3 用 50mL 包含 0.1% 三乙胺或氫氧化鈉的四氫呋喃:水 (1:1) 沖洗
1.4 用 50mL 包含 0.1% 三氟乙酸的四氫呋喃:水 (1:1) 溶液沖洗
1.5 用 70 倍柱體積的 THF 沖洗
1.6 用甲醇/水 (95:5) 沖洗以重新平衡
1.7 重新倒轉色譜柱方向
2.強有機溶劑清洗
用水相比例較高的流動相分析極性和/或離子化化合物時
2.1 用 50mL 丙酮沖洗
2.2 用 120mL 二丁醚沖洗
2.3 用 50mL 丙酮沖洗
2.4 用水溶液流動相沖洗直到達到平衡
3.正相模式的清洗
適用于使用正相流動相進行分析的應用。
3.1 用 50mL 二氯甲烷沖洗
3.2 用 50mL 甲醇沖洗
3.3 用 50mL 水沖洗
3.4 用 50mL 0.1M 鹽酸沖洗
3.5 用 50mL 水沖洗
3.6 用 50mL 甲醇沖洗
3.7 用 50mL 二氯甲烷沖洗
3.8 用流動相沖洗直到達到平衡
4. 移除 TFA 和 DEA
TFA 和DEA可能吸附于多孔石墨碳表面;在流動相中使用這些添加劑后,應對色譜柱進行再生以確保始終實現(xiàn) Hypercarb的原始選擇性和最佳性能。
再生程序如下:
4.1 移除 TFA:用 70 倍柱體積的 THF 沖洗。
4.2 移除 DEA:將柱溫設為75℃,然后用120倍柱體積的ACN 沖洗。
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