高效液相作為一種高精密儀器，如果在使用過程中不按照正確操作的話，就容易導(dǎo)致一些問題。其中比較常見的就是柱壓?jiǎn)栴}、漂移問題、峰型異常問題。

1、液相色譜儀柱壓?jiǎn)栴}

柱壓?jiǎn)栴}是使用高效液相色譜儀過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時(shí)間等密切相關(guān)。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個(gè)恒定值而是指壓力波動(dòng)范圍在50 PSI（3.3 Bar）之間（在使用梯度洗脫時(shí)，柱壓平穩(wěn)緩慢的變化是允許的）。壓力過高、過低都屬于柱壓?jiǎn)栴}。

（1）壓力過高

這是高效液相色譜儀在使用中最常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時(shí)，我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查。

a.首先斷開真空泵的入口處，此時(shí)PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。

處理方法：用30%的硝酸浸泡半個(gè)小時(shí)，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，再檢查；

b.打開Purge閥，使流動(dòng)相不經(jīng)過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。

處理方法：將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個(gè)小時(shí)。如果壓力降至100 PSI（6.7 Bar）以下，過濾白頭正常，再檢查；

c.把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。

處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動(dòng)相更強(qiáng)的流動(dòng)相沖至壓力正常。假如按上面的方法長(zhǎng)時(shí)間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用流動(dòng)相沖洗柱子。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。

（2）壓力過低

a.壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏，處理方法：尋找各個(gè)接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可；

b.當(dāng)然還有一個(gè)原因就是泵里進(jìn)了空氣，但此時(shí)表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn)，忽高忽低，更嚴(yán)重一點(diǎn)會(huì)導(dǎo)致泵無(wú)法吸上液體。處理方法：打開Purge閥，用3~5 ml/min的流速?zèng)_洗，如果不行，則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。

2、液相色譜儀漂移問題

主要包括基線漂移和保留時(shí)間漂移。

（1）基線漂移

一般說來，儀器剛起動(dòng)時(shí)，基線容易漂移，大概要半個(gè)小時(shí)的平衡時(shí)間。此外，在低波長(zhǎng)下（220 nm）平衡時(shí)間相對(duì)會(huì)比較長(zhǎng)。如果在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，需要考慮以下原因：

a.柱溫波動(dòng)。

解決方法：控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對(duì)著柱溫箱；

b.流通池被污染或有氣體。

解決方法：用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池（最好斷開柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）；

c.紫外燈能量不足。

解決方法：更換新的紫外燈；

d.流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。

解決方法：檢查流動(dòng)相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑；

e.樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。

解決方法：使用保護(hù)柱，同時(shí)，在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子；

f.檢測(cè)器沒有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處。

解決方法：將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處；

g.流動(dòng)相的PH值沒有調(diào)節(jié)好。

解決方法：加適量的酸或堿調(diào)至最佳PH值。

（2）保留時(shí)間漂移

保留時(shí)間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個(gè)重要標(biāo)志。同一種物質(zhì)，兩次保留時(shí)間相差不要超過半分鐘，超過了可看做保留時(shí)間漂移，則無(wú)法準(zhǔn)確定性，此時(shí)需考慮以下原因：

a.溫控不當(dāng)。解決方法：調(diào)好柱溫，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對(duì)著柱溫箱；

b.流動(dòng)相比例變化。解決方法：檢查四元泵的比例閥是否有故障；

c.色譜柱沒有平衡。解決方法：在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱；

d.流速變化。解決方法：重新設(shè)定流速 ；

e泵中有氣泡。解決方法：從泵中除去氣泡 。

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