首先,需要來了解一下液相色譜中色譜柱的損壞來源于哪些方面:
泵頭密封圈的磨損,進樣閥轉子密封圈的磨損,析出的緩沖鹽,樣品中的復雜易吸附基質,其實,在工作過程中大多數(shù)的顆粒物堵塞導致的色譜柱背壓升高問題是體現(xiàn)在柱頭堵塞。
而樣品的易吸附機制也可能會和柱前端的硅膠表面游離的硅醇基發(fā)生作用導致色譜柱背壓升高。但是這種情況在較低的PH系統(tǒng)中會有所改善,因為較低的PH系統(tǒng)會降低硅膠表面的硅醇基發(fā)生解離。
在液相色譜液相系統(tǒng)中加入在線過濾器
在線過濾器的內部顆??障兑话闶?.5微米,對于UHPLC會選擇0.2微米空隙的在線過濾器。這個空隙尺寸和柱頭的過濾篩板尺寸接近或者略小。
所以,在線過濾器能夠有效的阻隔來自樣品、泵頭密封墊、自動進樣器的轉子密封墊的顆粒物,以防止柱頭過濾篩板的堵塞。
注意:但是對于非常低死體積的液相系統(tǒng),在線過濾器的加入可能會導致系統(tǒng)死體積增大峰展寬變嚴重的問題。而對于大多數(shù)液相色譜中液相系統(tǒng)而言,色譜圖不會有太大變化。
在柱子前端使用保護柱
保護柱有很多種,通用型、一體式、卡套式,但是它其實是一個和分析柱固定相相同的10-20mm的小柱子。因為它具有和分析柱相同的內部填料,所以保護柱不僅可以阻隔顆粒物,還可以阻隔易吸附的樣品基質組分。
注意:由于保護柱中可能有大量的強保留組分,在用強溶劑清洗系統(tǒng)時請取下保護柱,以防止這些強保留組分被洗脫進分析柱。保護柱如果出現(xiàn)吸附飽和也可能會對分離效果有影響,例如圖中所示:對樣品進行凈化處理
有一些液相色譜的分析方法沒有明確標注樣品的凈化,但我希望大家在做分析時都能夠考慮樣品的凈化,常用的方案是對樣品進行過濾。
色譜柱的儲存
在實際工作中,色譜柱的儲存也會影響柱子的使用壽命。那么對于色譜柱的儲存,也有以下建議:短期儲存時,應該保存在最接近常用的流動相條件下。并且,一定要移除系統(tǒng)中的緩沖鹽、酸等。長期儲存時,將色譜柱按照說明書的要求保存在對應的溶劑中,并且將色譜柱從系統(tǒng)中取下兩頭用堵頭堵死。
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