優(yōu)選適宜復(fù)方丹參片干燥方法的研究

［摘要］為優(yōu)選適宜復(fù)方丹參片的干燥方法，探索微波真空干燥、真空干燥和烘箱干燥３種干燥工藝對(duì)丹參提取液的影響，采用 ＵＰＬＣ 法測(cè)定不同干燥方法的丹參提取液的 ＵＰＬＣ 特征圖譜及指標(biāo)性成分含量。結(jié)果表明：迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ濃度分別在０.００７～０.０２６ｍｇ／ｍＬ，０.１３０～０.４４０ｍｇ／ｍＬ，０.００２～０.００９ｍｇ／ｍＬ，０.００３～０.０１５ｍｇ／ｍＬ的線性關(guān)系良好（ｒ≥０.９９９１）.平均回收率分別為９９.３０％（ＲＳＤ＝０.６２％），９６.４１％（ＲＳＤ＝０.４７％），１００.５８％（ＲＳＤ＝１.２３％），１０２.８４％（ＲＳＤ＝１.０２％）。微波真空干燥、真空干燥和烘箱干燥后的指標(biāo)性成分總含量分別為６４.７８０５ｍｇ／ｇ、６４.５０１７ｍｇ／ｇ和５８.９９００ｍｇ／ｇ。３種干燥方法的ＵＰＬＣ特征圖譜相似度達(dá)０.９９７以上。綜合考慮微波真空干燥明顯優(yōu)于其他干燥方法。干燥是中藥制劑生產(chǎn)中的重要工藝，不同的干燥方法及干燥溫度可以使制劑的內(nèi)在質(zhì)量發(fā)生改變，進(jìn)而影響臨床療效。復(fù)方丹參片為藥典收載的品種被長(zhǎng)期廣泛用于氣滯血瘀所致的胸痹、胸悶、心前區(qū)刺痛、冠心病、心絞痛等癥［１］。丹參在處方中為主藥，具有祛瘀止痛、活血化瘀、養(yǎng)心除煩的功效，主要活性成分有水溶性酚酸類(lèi)化合物及脂溶性的丹參酮類(lèi)化合物。真空干燥、烘箱干燥是中成藥生產(chǎn)中被廣泛使用的干燥方法，主要采用空氣對(duì)流加熱，但傳熱效率慢，干燥所需時(shí)間長(zhǎng)，易出現(xiàn)表面假干燥現(xiàn)象且在干燥過(guò)程中易造成多酚酸類(lèi)、丹參酮ⅡＡ 等熱敏性成分的損失。微波真空干燥是通過(guò)微波輻射、傳熱方式與真空技術(shù)相結(jié)合的新型干燥技術(shù)，它可 使物料在低溫條件下完成干燥且傳熱效率高、干燥 時(shí)間短，不易出現(xiàn)表面假干燥和結(jié)殼現(xiàn)象，可有效保 證質(zhì)量品質(zhì)。超高效液相色譜（ＵＰＬＣ）是一種新型液相色譜技術(shù)，具有超高靈敏度、超強(qiáng)分離能力和速度等優(yōu)點(diǎn)，與ＨＰＬＣ指紋圖譜相比，ＵＰＬＣ指紋圖譜可大大縮短分析時(shí)間，且色譜峰分離更好，靈敏度 也更高，有效的提高了分析效率。目前文獻(xiàn)報(bào)道，丹 參提取液的干燥方式的選擇主要集中在常壓干燥、真空減壓干燥、噴霧干燥等方面，且評(píng)價(jià)指標(biāo)通常是 采用 ＨＰＬＣ 測(cè)定丹酚酸 Ｂ、丹參酮ⅡＡ 的含量，而通過(guò) ＵＰＬＣ 特征圖譜比較不同干燥工藝并對(duì)其中的多個(gè)指標(biāo)性成分進(jìn)行定量的研究尚未多見(jiàn)［６－９］。因此，試驗(yàn)采用 ＵＰＬＣ 技術(shù)，對(duì)復(fù)方丹參片中丹參的水溶性成分和脂溶性成分進(jìn)行研究，建立同一流 動(dòng)相條件下同時(shí)檢測(cè)多個(gè)成分的復(fù)方丹參片特征圖譜。從特征圖譜、指標(biāo)性成分含量、干燥時(shí)間、含水 量、干膏性狀、干膏量、干膏收率及能耗方面對(duì)３ 種干燥方法進(jìn)行綜合比較，為復(fù)方丹參片大生產(chǎn)中的干燥工藝優(yōu)化提供參考。

１材料與方法１.１試驗(yàn)材料藥材及藥品：丹參藥材均購(gòu)于貴陽(yáng)同濟(jì)堂（批號(hào)２０１３０９２８，產(chǎn)地山東），經(jīng)鑒定為中國(guó)藥典品種；丹參酮ⅡＡ（批號(hào)５６８－７２－９），迷迭香酸（批號(hào)２０２８３－９２－５），丹酚酸Ｂ（批號(hào)１１５９３９－２５－８）均購(gòu)于成都瑞芬思生物科技有限公司，純度≥９８％，隱丹參酮（批號(hào)８５２－９９０３中國(guó)藥品生物制品檢定所），供含量測(cè)定用；甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），甲酸（色譜純），屈臣氏蒸餾水。其他試劑均為分析純。儀器：ＷＢＺ－２ 型微波真空干燥機(jī)（功率２ＫＷ， 貴陽(yáng)新奇微波工業(yè)有限責(zé)任公司），真空干燥箱（型號(hào)ＤＺＦ－６２１０加熱功率２ｋｗ，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司），遠(yuǎn)紅外鼓風(fēng)快速干燥箱（型號(hào)ＹＨＧ－５００－ＢＳ－ＩＩ加熱功率２ｋｗ，上海費(fèi)德試驗(yàn)設(shè)備有限公司），超聲波清洗器（型號(hào)ＳＫ８２１０ＨＰ，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司），超高效液相色譜儀（型號(hào)ＷａｔｅｓＵＰＬＣ，沃特斯中國(guó)有限公司）。１.２丹參提取液的制備稱(chēng)取丹參藥材４００ｇ，加入１０倍量的９５％乙醇回流１.５ｈ，濾液回收乙醇并減壓濃縮至適量；藥渣加１０倍量５０％乙醇回流1.５ｈ，濾液回收乙醇并濃縮至適量；藥渣加１０倍量的水煎煮２ｈ，濾液濃縮至適量；合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為１.１１左右的清膏，將清膏分為８份，備用。１.３干燥方法１.３.１烘箱干燥稱(chēng)取丹參清膏１０２ｇ，平行制備２份，分別置于５００ｍＬ蒸發(fā)皿中，置于遠(yuǎn)紅外鼓風(fēng)快速干燥箱中，溫度設(shè)定為６０℃，干燥后稱(chēng)定干膏重量，并測(cè)定含水量。１.３.２真空干燥稱(chēng)取丹參清膏１０２ｇ，平行制備２份，分別置于５００ｍＬ蒸發(fā)皿中，置真空干燥箱內(nèi)，溫度設(shè)定為６０℃，真空度為－０.０７ ＭＰａ，干燥后稱(chēng)定干膏重量，并測(cè)定含水量。１.３.３微波真空干燥稱(chēng)取丹參清膏１０２ｇ，置于微波專(zhuān)用物料盒內(nèi)，在微波真空干燥箱中干燥，干燥過(guò)程為功率１和功率２ 交替變化的加熱方式，功率１微波１５ｍｉｎ左右，功率２微波２０ｍｉｎ左右，溫度控制在１７～４０℃，真空度為－０.０７ＭＰａ，干燥后稱(chēng)定干膏重量，并測(cè)定含水量。１.４ＵＰＬＣ特征圖譜的建立１.４.１色譜條件色譜柱：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＳｈｉｅｌｄＲＰ１８１.７μｍ２.１×５０ｍｍ Ｃｏｌｕｍｎ；流動(dòng)相：０.５％甲酸水（Ａ）－乙腈（Ｂ）梯度洗脫，柱溫：３０℃，流速：０.２ｍＬ／ｍｉｎ，檢測(cè)波長(zhǎng)：２７０ｎｍ，進(jìn)樣量２μＬ。理論板數(shù)按丹參酮ⅡＡ峰計(jì)算應(yīng)不低于２０００。梯度洗脫條件：０～１０ｍｉｎ，１０％～２７.５％ Ｂ；１０～１５ｍｉｎ，２７.５％～３２％Ｂ；１５～３５ｍｉｎ， ３２％～５０％Ｂ。１.４.２對(duì)照品溶液的配制精密稱(chēng)取迷迭香酸６.４６ｍｇ、丹酚酸Ｂ２１.８２ｍｇ、隱丹參酮２.７０ｍｇ、丹參酮ⅡＡ４.６９ｍｇ，置于２５ｍＬ量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，制得濃度分別為０.２５８４ｍｇ／ｍＬ、０.８７２８ｍｇ／ｍＬ、０.１０８０ｍｇ／ｍＬ、０.１８７６ｍｇ／ｍＬ 對(duì)照品儲(chǔ)備液。１.４.３供試品溶液的制備精密稱(chēng)取丹參干燥浸膏粉０.１ｇ，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇２５ｍＬ，密塞，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲提取１５ｍｉｎ，放冷，再稱(chēng)定，用甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。１.５方法學(xué)考察１）線性回歸。分別精密吸取迷迭香酸儲(chǔ)備液、丹酚酸Ｂ 儲(chǔ)備液、隱丹參酮儲(chǔ)備液、丹參酮ⅡＡ 儲(chǔ)備液配成６個(gè)不同濃度的混合對(duì)照品溶液（混合對(duì)照品溶液中迷迭香酸的濃度分別為７.７５μｇ／ｍＬ、１０.３４μｇ／ｍＬ、１５.５０μｇ／ｍＬ、１８.６０μｇ／ｍＬ、２０.６７μｇ／ｍＬ、２５.８４μｇ／ｍＬ，丹酚酸Ｂ的濃度分別為１１３.０９μｇ／ｍＬ、１７.４５μｇ／ｍＬ、２６.１８μｇ／ｍＬ、３１.４２μｇ／ｍＬ、３４.９１μｇ／ｍＬ、４３.６４μｇ／ｍＬ，隱丹參酮的濃度分別為２.１６μｇ／ｍＬ、３.２４μｇ／ｍＬ、 ４.３２μｇ／ｍＬ、５.１８μｇ／ｍＬ、６．４８μｇ／ｍＬ、８.１０μｇ／ｍＬ，丹參酮ⅡＡ的濃度分別為３.７５μｇ／ｍＬ、５.６３μｇ／ｍＬ、７.５０μｇ／ｍＬ、９.００μｇ／ｍＬ、１１.２６μｇ／ｍＬ、１４.０７μｇ／ｍＬ）注入ＵＰＬＣ測(cè)定，以進(jìn)樣濃度（ｘ，ｍｇ／ｍＬ）為橫坐標(biāo)，峰面積（Ａ）為縱坐標(biāo)，計(jì)算線性回歸。２）精密度試驗(yàn)。取供試品溶液，按上述相應(yīng)的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣６ 次，檢測(cè)特征峰。記錄迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ色譜峰的保留時(shí)間及峰面積，以丹酚酸為參照峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積、各成分峰面積ＲＳＤ（ｎ＝６）。３）穩(wěn)定性試驗(yàn)。取供試品溶液，分別于 ０ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、１６ｈ、２４ｈ測(cè)定。記錄迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ 色譜峰的保留時(shí)間及峰面積，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積、各成分峰面積ＲＳＤ（ｎ＝６）。４）重復(fù)性試驗(yàn)。取同一干燥方法下的樣品，按１.４.３制備供試品溶液，共６份，分別取樣測(cè)定。記錄迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ 色譜峰的保留時(shí)間及峰面積，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積、各成分含量ＲＳＤ（ｎ＝６）。５）加樣回收。精密稱(chēng)?。?份已知含量的樣品０.０５ｇ，按照１００％樣品含量分別加入混合對(duì)照品溶液，按１.３.３制備供試品溶液，１.４.１色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，考察４個(gè)指標(biāo)性成分的平均回收率（ｎ＝６）。１.６不同干燥方法的特征圖譜測(cè)定精密吸取各干燥法的供試品溶液和參照物溶液２μＬ，注入ＵＰＬＣ，按照１．４．１色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。

２結(jié)果與分析２.１不同干燥工藝對(duì)評(píng)價(jià)指標(biāo)的影響由表１可知，微波真空干燥的干燥時(shí)間短，僅需４０ｍｉｎ左右，且得到的干膏疏松多孔、含水量低；而常壓干燥與減壓真空干燥的干燥時(shí)間需５ｄ左右， 干膏的硬度較大；顯然微波干燥大大縮短了時(shí)間，在工業(yè)化生產(chǎn)中可以提高工作效率，具有明顯的優(yōu)勢(shì)。２.２ＵＰＬＣ特征圖譜的方法學(xué)考察２.２.１線性關(guān)系迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ的線性回歸方程分別為：ｙ＝１０７ｘ－５４３４.６（Ｒ＝０.９９９１），ｙ＝１０７ｘ－２５９５４２（Ｒ＝０.９９９５），ｙ＝３×１０７ｘ－６０６４.２（Ｒ＝０.９９９１），ｙ＝５×１０７ｘ－４６５９.８（Ｒ＝０.９９９１）；迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ濃度分別在０.００７～０.０２６ｍｇ／ｍＬ，０.１３０～０.４４０ ｍｇ／ｍＬ，０.００２～０．００９ｍｇ／ｍＬ，０.００３～０.０１５ｍｇ／ｍＬ與其色譜峰面積成良好的線性關(guān)系。

２.２.２精密度試驗(yàn)顯示，迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ峰面積的ＲＳＤ分別為０.６５％、０.７０％、１.１１％和０.９２％，且４種成分的相對(duì)保留時(shí)間ＲＳＤ均小于２.１０％，相對(duì)峰面積ＲＳＤ均小于１.４１％，表明儀器精密度良好。２.２.３穩(wěn)定性迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ峰面積的ＲＳＤ分別為０.８７％、１.０７％、２.０９％、１.４９％，４種成分在６個(gè)不同時(shí)刻的相對(duì)保留時(shí)間ＲＳＤ均小于０.０５％，相對(duì)峰面積ＲＳＤ均小于３.００％，表明４種成分在２４ｈ內(nèi)穩(wěn)定。２.２.４重復(fù)性試驗(yàn)表明，６份供試品溶液中４種成分含量結(jié)果ＲＳＤ均小于１.０１％，相對(duì)保留時(shí)間ＲＳＤ均小于０.１０％，相對(duì)峰面積ＲＳＤ均小于１.７５％，說(shuō)明此方法的重復(fù)性良好。２.２.５加樣回收試驗(yàn)表明，常規(guī)干燥條件下的丹參提取物樣品中迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ的平均回收分別為９９.３０（ＲＳＤ＝０.６２％），９６.４１（ＲＳＤ＝０.４７％），１００.５８（ＲＳＤ＝１.２３％），１０２.８４（ＲＳＤ＝１.０２％），各項(xiàng)ＲＳＤ值均小于３.０％。說(shuō)明，此方法能夠準(zhǔn)確測(cè)定該樣品中的４種指標(biāo)性成分含量。２.３不同干燥方法的特征圖譜測(cè)定由圖示可知，各干燥工藝下的丹參提取物主要化學(xué)成分類(lèi)型基本無(wú)差異，主要是各組分在含量上的差別。采用國(guó)家藥典委員會(huì)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（２００４年Ａ版）對(duì)３種干燥工藝的圖譜進(jìn)行相似度計(jì)算，相似度達(dá)０．９９７以上。

２.４指標(biāo)性成分的含量對(duì)比通過(guò)數(shù)據(jù)比較分析（表２），微波真空干燥和減壓真空干燥兩種干燥方式對(duì)水溶性的酚酸類(lèi)及脂溶性的丹參酮類(lèi)含量影響不大；而烘箱干燥則明顯的使丹酚酸Ｂ 和丹參酮ⅡＡ的含量大大降低。烘箱干燥的干燥時(shí)間長(zhǎng)，加熱溫度高，浸膏表面易硬化結(jié)殼不利于浸膏內(nèi)部水分蒸發(fā)，特別容易造成酚酸類(lèi)成分、丹參酮ⅡＡ 等熱敏性成分的損失。微波真空干燥，在干燥過(guò)程中溫度梯度、傳熱和蒸汽壓遷移方向均一致，具有干燥溫度低、干燥速度快、受熱均勻、效率高等優(yōu)點(diǎn)，可有效保證有效成分的含量。因此使得微波真空干燥后的指標(biāo)性成分總含量明顯高于常壓的烘箱干燥。３結(jié)論與討論通過(guò)試驗(yàn)，建立了丹參提取物中迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ同時(shí)測(cè)定的方法。確定以乙腈（Ｂ）－０.５％甲酸水（Ａ）溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫（０～１０ｍｉｎ，１０％～２７.５％Ｂ；１０～１５ｍｉｎ， ２７.５％～３２％Ｂ；１５～３５ｍｉｎ，３２％～５０％Ｂ），選擇在２７０ｎｍ出峰較多，各組分都有較好吸收的波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。采用甲醇為提取溶劑、超聲提取方 法作為供試品的制備方法。特征圖譜技術(shù)是一種可以綜合評(píng)價(jià)復(fù)雜多組分化學(xué)成分樣品的質(zhì)量控制方法。試驗(yàn)以迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ 為特征峰對(duì)不同干燥工藝的丹參提取物進(jìn)行特征圖譜研究，可看出各 干燥方法的丹參提取物的化學(xué)成分無(wú)差異，主要是 各組分在含量上的差別。通過(guò)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)對(duì)精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的相似度進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果表明，試驗(yàn)建立的特征圖譜穩(wěn)定性和可控性良好。試驗(yàn)中真空干燥、烘箱干燥、微波真空干燥的時(shí)間分別為１１５ｈ，１２６ｈ，０.６２ｈ，前兩種干燥方法的干燥時(shí)間分別是微波真空干燥的１８５倍和２０３倍。微波真空干燥的總耗電量為０.２５ｋｗ／ｈ，而真空干燥和烘箱干燥的總耗電量分別是２３０ｋｗ／ｈ 和２５２ｋｗ／ｈ，因此真空干燥和烘箱干燥在總耗電量方面是微波真空干燥的近１０００倍。微波真空干燥得到的干膏性狀疏松多孔，易碎成細(xì)粉，且表面大，比 烘箱干燥得到的粉體更易吸潮，應(yīng)及時(shí)密封保存。在微波干燥過(guò)程中，由于溫度梯度、傳熱和蒸汽壓遷移方向均一致，因此干燥時(shí)間短、加熱溫度低，使干膏中有效成分損失小。真空干燥雖然干燥溫度較低，但傳熱速度慢，干燥的時(shí)間長(zhǎng)。烘箱干燥的時(shí)間長(zhǎng)，溫度高，使干膏中的有效成分損失最大。綜合考慮，３種干燥工藝對(duì)指標(biāo)性成分含量、干燥時(shí)間、含水量、干膏性狀、干膏量、干膏收率及能耗的影響，微波真空干燥明顯優(yōu)于其他兩種干燥方法。因此，微波真空干燥是一種有效、實(shí)用、有前景的新型干燥技術(shù)，非常適合于中成藥生產(chǎn)，可以有效為復(fù)方丹參片大生產(chǎn)中的干燥工藝優(yōu)化提供參考，在工業(yè)化生產(chǎn)中具有較大的應(yīng)用價(jià)值。

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