傳統酶標儀是指具備吸收光檢測功能的酶聯免疫檢測儀，隨著科學技術發(fā)展和市場需求不斷豐富，如今酶標儀所具備的檢測功能日益豐富。接下來，由筆者帶大家快速了解酶標儀的各種檢測技術。
酶標儀即酶聯免疫檢測儀，酶標儀檢測技術是一種高通量微孔板檢測技術，操作簡便，被廣泛應用于生命科學、生物制藥、體外診斷、食品安全、環(huán)境科學等領域。
  傳統酶標儀是指具備吸收光檢測功能的酶聯免疫檢測儀，隨著科學技術發(fā)展和市場需求不斷豐富，如今酶標儀所具備的檢測功能日益豐富，在吸收光檢測(Abs)基礎上增加了熒光強度(FI)、發(fā)光檢測(Lum)、熒光偏振(FP)、時間分辨熒光(TRF)、勻相時間分辨熒光(HTRF)以及Alpha檢測等多種檢測技術。然而每一種技術都具有獨特的應用價值和局限性，筆者將主流的酶標儀檢測技術進行匯總，分為上、下兩篇，以饗讀者。
1、吸收光檢測（Absorbance,Abs）
  中國自主創(chuàng)新能力正在不斷提升，科技創(chuàng)新成為推動國家經濟發(fā)展和國際競早期的酶標儀實際上是一臺變相的專用光電比色計或分光光度計，其工作原理與主要結構和光電比色計基本相同，在特定波長下檢測到的被測物的吸光值。光通過被檢測物前后的能量差異即為被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關系，即符合朗伯比爾定律。
  檢測時，光波由光源燈發(fā)射并經過濾光片或單色器變成一束單色光，照射到微孔板中的待測樣本，一部分光被樣本吸收，另一部分則透過樣本照射到光電檢測器上，光電檢測器將不同待測樣本的強弱不同的光信號轉換成相應電信號，再經信號處理后送入微處理器進行數據處理和計算，最后由顯示器顯示結果。

典型應用：核酸和蛋白質定量、ELISA、酶學檢測、細菌生長OD600測定、LAL內毒素檢測、MMT/CCK8等細胞活力分析。

2、熒光強度（Fluorescence Intensity,FI）
  熒光是發(fā)光體分子中處于激發(fā)態(tài)的原子核外電子由高能級回到低能級所產生的輻射，因此是冷光。熒光的顏色多為藍色、綠色、紅色和黃色等。熒光強度即發(fā)射熒光的光量子數，熒光強度與溶液吸收光強度，熒光量子效率以及周圍環(huán)境等因素有關。當其他因素保持不變，熒光強度與該物質溶液的濃度成正比，這也是熒光檢測的定量依據。 
  熒光酶標儀通常包含光源、用于選擇激發(fā)光的光學系統（即濾光片和/或光柵）、用于選擇發(fā)射光的第二光學系統以及檢測器。檢測時，采用特定波長激發(fā)光來激發(fā)樣品孔內的熒光標志物，通過檢測器檢測熒光物質被激發(fā)產生的發(fā)生光。

典型應用：核酸等生物大分子定量、酶活性分析、熒光免疫分析、細胞學分析（細胞增殖、細胞毒理、細胞吸附等）、胞內鈣離子濃度的變化、熒光蛋白的報道基因分析 (GFP)、細胞凋亡等。

3、發(fā)光檢測（Luminescence,Lum）
  光檢測包括化學發(fā)光和生物發(fā)光，是樣本孔內發(fā)生的化學、生化或者酶反應發(fā)出的光信號。與吸收光和熒光檢測不同的是，發(fā)光檢測不需要激發(fā)光源，這就使得發(fā)光更敏感，更不容易引起背景噪音。 
  化學發(fā)光是由化學反應引起的一種特殊的發(fā)光現象，即通過氧化還原反應釋放的能量將體系中某一物質從基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)，隨后以輻射發(fā)光（紫外光、可見光或近紅外光）的形式返回基態(tài)釋放能量?；瘜W發(fā)光由化學激發(fā)過程和發(fā)光過程兩部分組成。根據能量作用過程，化學發(fā)光主要分為直接發(fā)光和間接發(fā)光兩類。
  生物發(fā)光是生物體內的發(fā)光蛋白通過消耗能量物質而產生的發(fā)光現象，其特點是只消耗能量物質,不消耗發(fā)光物質。生物發(fā)光屬于冷光范疇,即發(fā)光不是由于發(fā)光體溫度升高所致,發(fā)射波長也與其溫度無關。目前被發(fā)現的生物發(fā)光底物有蟲熒光素、腔腸素、蝦素等。 

典型應用：單/雙熒光素酶報告基因、BRET、細胞活力檢測、細胞增殖檢測、支原體檢測、細胞毒性檢測、ATP、dsDNA、水母發(fā)光蛋白Ca2+、基于化學發(fā)光的ELISA檢測等。

4、熒光偏振（Fluorescence polarization,FP）
  1926年，Perrin首先描述了熒光偏振理論，以單一波長偏振光照射溶液中的熒光物質，當熒光分子受平面偏振光激發(fā)時，如果分子在受激發(fā)時期（對于熒光素約持續(xù)4納秒）保持靜止，發(fā)射光將位于同樣的偏振光平面；如果在受激發(fā)時期，分子旋轉或翻轉偏離這一平面，發(fā)射光將位于與激發(fā)光不同的偏振面，即熒光的去偏振現象。 
  熒光偏振檢測技術通過分析體系中熒光分子的偏振信號變化差異，實現對分子間相互作用的研究以及所選目標物的檢測，其計算依據為熒光偏振光強度與待檢測物質含量呈正相關性。 
  檢測時，熒光物質標記在特定物質上使原本微弱的反應信號轉化成較強的熒光信號，起到信號增強的作用。與此同時，在檢測系統中加上起偏器和檢偏器，當從光源發(fā)出的一束光線經垂直起偏器后成為垂直偏振光，樣品被垂直偏振光激發(fā)而產生偏振熒光，此熒光經檢偏器后可測出與樣品濃度有關的水平或垂直方向的熒光偏振光強度。
典型應用：受體/配體研究（如激素/受體檢測），蛋白質/多肽相互作用，DNA/蛋白質相互作用，酪氨酸激酶檢測，競爭性免疫檢測、單核苷酸多態(tài)性篩選、實時定量PCR-FP、體外細胞損失檢測等。 
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