優(yōu)選適宜復(fù)方丹參片干燥方法的研究

［摘 要］為優(yōu)選適宜復(fù)方丹參片的干燥方法，探索微波真空干燥、真空干燥和烘箱干燥３種干燥工藝對丹參提取液的影響，采用 ＵＰＬＣ 法測定不同干燥方法的丹參提取液的 ＵＰＬＣ 特征圖譜及指標(biāo)性成分含量。結(jié)果表明：迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ 濃度分別在０.００７～０.０２６ ｍｇ／ｍＬ，０.１３０～０.４４０ ｍｇ／ｍＬ，０.００２～０.００９ ｍｇ／ｍＬ，０.００３～０.０１５ ｍｇ／ｍＬ 的線性關(guān)系良好（ｒ≥０.９９９１）.平均回收率分別為９９.３０％（ＲＳＤ＝０.６２％），９６.４１％（ＲＳＤ＝０.４７％），１００.５８％（ＲＳＤ＝１.２３％），１０２.８４％（ＲＳＤ＝１.０２％）。微波真空干燥、真空干燥和烘箱干燥后的指標(biāo)性成分總含量分別為６４.７８０ ５ ｍｇ／ｇ、６４.５０１７ ｍｇ／ｇ和５８.９９００ ｍｇ／ｇ。３種干燥方法的 ＵＰＬＣ 特征圖譜相似度達０.９９７以上。綜合考慮微波真空干燥明顯優(yōu)于其他干燥方法。干燥是中藥制劑生產(chǎn)中的重要工藝，不同的干燥方法及干燥溫度可以使制劑的內(nèi)在質(zhì)量發(fā)生改變，進而影響臨床療效。復(fù)方丹參片為藥典收載的品種被長期廣泛用于氣滯血瘀所致的胸痹、胸悶、心前區(qū)刺痛、冠心病、心絞痛等癥［１］。丹參在處方中為主藥，具有祛瘀止痛、活血化瘀、養(yǎng)心除煩的功效，主要活性成分有水溶性酚酸類化合物及脂溶性的丹參酮類化合物。真空干燥、烘箱干燥是中成藥生產(chǎn)中被廣泛使用的干燥方法，主要采用空氣對流加熱，但傳熱效率慢，干燥所需時間長，易出現(xiàn)表面假干燥現(xiàn)象且在干燥過程中易造成多酚酸類、丹參酮ⅡＡ 等熱敏性成分的損失。微波真空干燥是通過微波輻射、傳熱方式與真空技術(shù)相結(jié)合的新型干燥技術(shù)，它可 使物料在低溫條件下完成干燥且傳熱效率高、干燥 時間短，不易出現(xiàn)表面假干燥和結(jié)殼現(xiàn)象，可有效保 證質(zhì)量品質(zhì)。超高效液相色譜（ＵＰＬＣ）是一種新型液相色譜技術(shù)，具有超高靈敏度、超強分離能力和速度等優(yōu)點，與 ＨＰＬＣ指紋圖譜相比，ＵＰＬＣ指紋圖譜可大大縮短分析時間，且色譜峰分離更好，靈敏度 也更高，有效的提高了分析效率。目前文獻報道，丹 參提取液的干燥方式的選擇主要集中在常壓干燥、真空減壓干燥、噴霧干燥等方面，且評價指標(biāo)通常是 采用 ＨＰＬＣ 測定丹酚酸 Ｂ、丹參酮ⅡＡ 的含量，而通過 ＵＰＬＣ 特征圖譜比較不同干燥工藝并對其中的多個指標(biāo)性成分進行定量的研究尚未多見［６－９］。因此，試驗采用 ＵＰＬＣ 技術(shù)，對復(fù)方丹參片中丹參的水溶性成分和脂溶性成分進行研究，建立同一流 動相條件下同時檢測多個成分的復(fù)方丹參片特征圖譜。從特征圖譜、指標(biāo)性成分含量、干燥時間、含水 量、干膏性狀、干膏量、干膏收率及能耗方面對３ 種干燥方法進行綜合比較，為復(fù)方丹參片大生產(chǎn)中的干燥工藝優(yōu)化提供參考。

１  材料與方法１.１  試驗材料藥材及藥品：丹參藥材均購于貴陽同濟堂（批號２０１３０９２８，產(chǎn)地山東），經(jīng)鑒定為中國藥典品種；丹參酮ⅡＡ（批 號 ５６８－７２－９），迷 迭香酸 （批 號 ２０２８３－９２－５），丹酚酸Ｂ（批號１１５９３９－２５－８）均購于成都瑞芬思生物科技有限公司，純度≥９８％，隱丹參酮（批號８５２－９９０３中國藥品生物制品檢定所），供含量測定用；甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），甲酸（色譜純），屈臣氏蒸餾水。其他試劑均為分析純。儀器：ＷＢＺ－２ 型微波真空干燥機（功率２ＫＷ， 貴陽新奇微波工業(yè)有限責(zé)任公司），真空干燥箱（型號ＤＺＦ－６２１０加熱功率２ｋｗ，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司），遠紅外鼓風(fēng)快速干燥箱（型號ＹＨＧ－５００－ＢＳ－ＩＩ加熱功率２ｋｗ，上海費德試驗設(shè)備有限公司），超聲波清洗器（型號ＳＫ８２１０ＨＰ，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司），超 高效液相色譜儀 （型 號 ＷａｔｅｓＵＰＬＣ，沃特斯中國有限公司）。１.２  丹參提取液的制備稱取丹參藥材４００ｇ，加入１０ 倍量的９５％ 乙醇回流１.５ｈ，濾液回收乙醇并減壓濃縮至適量；藥渣加１０倍量５０％乙醇回流1.５ｈ，濾液回收乙醇并濃縮至適量；藥渣加１０倍量的水煎煮２ｈ，濾液濃縮至適量；合并濾液，濃縮至相對密度為１.１１左右的清膏，將清膏分為８份，備用。１.３  干燥方法１.３.１  烘箱干燥  稱取丹參清膏１０２ｇ，平行制備２份，分別置于５００ｍＬ蒸發(fā)皿中，置于遠紅外鼓風(fēng)快速干燥箱中，溫度設(shè)定為６０℃，干燥后稱定干膏重量，并測定含水量。１.３.２  真空干燥  稱取丹參清膏１０２ｇ，平行制備２份，分別置于５００ｍＬ蒸發(fā)皿中，置真空干燥箱內(nèi)，溫度設(shè)定為６０℃，真空度為－０.０７ ＭＰａ，干燥后稱定干膏重量，并測定含水量。１.３.３  微波真空干燥  稱取丹參清膏１０２ｇ，置于微波專用物料盒內(nèi)，在微波真空干燥箱中干燥，干燥過程為功率１和功率２ 交替變化的加熱方式，功率１微波１５ｍｉｎ左右，功率２微波２０ｍｉｎ左右，溫度控制在１７～４０℃，真空度為－０.０７ ＭＰａ，干燥后稱定干膏重量，并測定含水量。１.４  ＵＰＬＣ特征圖譜的建立１.４.１   色譜條件   色 譜 柱：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＳｈｉｅｌｄＲＰ１８１.７μｍ２.１×５０ｍｍ Ｃｏｌｕｍｎ；流動相：０.５％ 甲酸水（Ａ）－乙腈（Ｂ）梯度洗脫，柱溫：３０℃，流速：０.２ｍＬ／ｍｉｎ，檢測波長：２７０ｎｍ，進樣量２μＬ。 理論板數(shù)按丹參酮ⅡＡ 峰計算應(yīng)不低于２０００。梯度洗脫條件：０～１０ ｍｉｎ，１０％ ～２７.５％ Ｂ；１０～１５ ｍｉｎ，２７.５％ ～３２％ Ｂ；１５～３５ ｍｉｎ， ３２％～５０％ Ｂ。１.４.２  對照品溶液的配制   精密稱取迷迭香酸６.４６ ｍｇ、丹酚酸 Ｂ２１.８２ ｍｇ、隱丹參酮２.７０ ｍｇ、丹參酮ⅡＡ４.６９ ｍｇ，置于２５ ｍＬ 量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，制得濃度分別為０.２５８４ ｍｇ／ｍＬ、０.８７２８ｍｇ／ｍＬ、０.１０８０ｍｇ／ｍＬ、０.１８７６ｍｇ／ｍＬ 對照品儲備液。１.４.３  供試品溶液的制備  精密稱取丹參干燥浸膏粉０.１ ｇ，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇２５ｍＬ，密塞，稱定質(zhì)量，超聲提取１５ｍｉｎ，放冷，再稱定，用甲醇補足失重，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。１.５  方法學(xué)考察１）線性回歸。分別精密吸取迷迭香酸儲備液、丹酚酸Ｂ 儲備液、隱丹參酮儲備液、丹參酮ⅡＡ 儲備液配成６個不同濃度的混合對照品溶液（混合對照品溶液中迷迭香酸的濃度分別為７.７５ μｇ／ｍＬ、１０.３４μｇ／ ｍＬ、１５.５０ μｇ／ｍＬ、１８.６０ μｇ／ｍＬ、２０.６７μｇ／ｍＬ、２５.８４μｇ／ｍＬ，丹酚酸 Ｂ 的濃度分別為 １１３.０９ μｇ／ｍＬ、１７.４５ μｇ／ｍＬ、２６.１８ μｇ／ｍＬ、３１.４２μｇ／ｍＬ、３４.９１μｇ／ｍＬ、４３.６４μｇ／ｍＬ，隱丹參 酮 的 濃 度 分 別 為 ２.１６ μｇ／ｍＬ、３.２４ μｇ／ｍＬ、 ４.３２μｇ／ ｍＬ、５.１８ μｇ／ｍＬ、６．４８ μｇ／ｍＬ、８.１０μｇ／ｍＬ，丹 參酮ⅡＡ的濃度分別為 ３.７５ μｇ／ｍＬ、５.６３μｇ／ｍＬ、７.５０μｇ／ｍＬ、９.００μｇ／ｍＬ、１１.２６μｇ／ｍＬ、１４.０７μｇ／ｍＬ）注入 ＵＰＬＣ 測定，以進樣濃度（ｘ，ｍｇ／ｍＬ）為橫坐標(biāo)，峰面積（Ａ）為縱坐標(biāo)，計算線性回歸。２）精密度試驗。取供試品溶液，按上述相應(yīng)的色譜條件連續(xù)進樣６ 次，檢測特征峰。記錄迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ色譜峰的保留時間及峰面積，以丹酚酸為參照峰，計算相對保留時間、相對峰面積、各成分峰面積ＲＳＤ（ｎ＝６）。３）穩(wěn)定性試驗。取供試品溶液，分別于 ０ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、１６ｈ、２４ｈ測定。記錄迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ 色譜峰的保留時間及峰面積，計算相對保留時間、相對峰面積、各成分峰面積ＲＳＤ（ｎ＝６）。４）重復(fù)性試驗。取同一干燥方法下的樣品，按１.４.３制備供試品溶液，共６份，分別取樣測定。記錄迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ 色譜峰的保留時間及峰面積，計算相對保留時間、相對峰面積、各成分含量ＲＳＤ（ｎ＝６）。５）加樣回收。精密稱?。?份已知含量的樣品０.０５ｇ，按照１００％樣品含量分別加入混合對照品溶液，按１.３.３制備供試品溶液，１.４.１色譜條件進樣測定，考察４個指標(biāo)性成分的平均回收率（ｎ＝６）。１.６   不同干燥方法的特征圖譜測定精密吸取各干燥法的供試品溶液和參照物溶液２μＬ，注入 ＵＰＬＣ，按照１．４．１色譜條件測定，記錄色譜圖。

２  結(jié)果與分析２.１   不同干燥工藝對評價指標(biāo)的影響由表１可知，微波真空干燥的干燥時間短，僅需４０ｍｉｎ左右，且得到的干膏疏松多孔、含水量低；而常壓干燥與減壓真空干燥的干燥時間需５ｄ左右， 干膏的硬度較大；顯然微波干燥大大縮短了時間，在工業(yè)化生產(chǎn)中可以提高工作效率，具有明顯的優(yōu)勢。２.２  ＵＰＬＣ特征圖譜的方法學(xué)考察２.２.１  線性關(guān)系  迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ 的線性回歸方程分別為：ｙ＝１０７ｘ－５４３４.６（Ｒ＝０.９９９１），ｙ＝１０７ｘ－２５９５４２（Ｒ＝０.９９９５），ｙ＝３× １０７ｘ－６０６４.２（Ｒ＝０.９９９１），ｙ＝５×１０７ｘ－４６５９.８（Ｒ＝０.９９９１）；迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ濃度分別在０.００７～０.０２６ ｍｇ／ｍＬ，０.１３０～０.４４０ ｍｇ／ｍＬ，０.００２～０．００９ｍｇ／ｍＬ，０.００３～０.０１５ｍｇ／ｍＬ與其色譜峰面積成良好的線性關(guān)系。

２.２.２   精密度試驗顯示，迷迭香酸、丹酚酸 Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ峰面積的ＲＳＤ 分別為０.６５％、０.７０％、１.１１％和０.９２％，且４種成分的相對保留時間ＲＳＤ均小于２.１０％，相對峰面積 ＲＳＤ均小于１.４１％，表明儀器精密度良好。２.２.３   穩(wěn)定性迷迭香酸、丹酚酸 Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ峰面積的 ＲＳＤ 分別為０.８７％、１.０７％、２.０９％、１.４９％，４種成分在６個不同時刻的相對保留時間ＲＳＤ均小于０.０５％，相對峰面積ＲＳＤ均小于３.００％，表明４種成分在２４ｈ內(nèi)穩(wěn)定。２.２.４  重復(fù)性  試驗表明，６份供試品溶液中４種成分含量結(jié)果 ＲＳＤ均小于１.０１％，相對保留時間ＲＳＤ均 小 于 ０.１０％，相 對 峰 面 積 ＲＳＤ均 小 于１.７５％，說明此方法的重復(fù)性良好。２.２.５  加樣回收試驗表明，常規(guī)干燥條件下的丹參提取物樣品中迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ 的平均回收分別為９９.３０（ＲＳＤ ＝０.６２％），９６.４１（ＲＳＤ＝０.４７％），１００.５８（ＲＳＤ＝１.２３％），１０２.８４（ＲＳＤ＝１.０２％），各項 ＲＳＤ值均小于３.０％。說明，此方法能夠準確測定該樣品中的４種指標(biāo)性成分含量。２.３  不同干燥方法的特征圖譜測定由圖示可知，各干燥工藝下的丹參提取物主要化學(xué)成分類型基本無差異，主要是各組分在含量上的差別。采用國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（２００４年 Ａ版）對３種干燥工藝的圖譜進行相似度計算，相似度達０．９９７以上。

２.４  指標(biāo)性成分的含量對比通過數(shù)據(jù)比較分析（表２），微波真空干燥和減壓真空干燥兩種干燥方式對水溶性的酚酸類及脂溶性的丹參酮類含量影響不大；而烘箱干燥則明顯的使丹酚酸Ｂ 和丹參酮ⅡＡ的含量大大降低。烘箱干燥的干燥時間長，加熱溫度高，浸膏表面易硬化結(jié)殼不利于浸膏內(nèi)部水分蒸發(fā)，特別容易造成酚酸類成分、丹參酮ⅡＡ 等熱敏性成分的損失。微波真空干燥，在干燥過程中溫度梯度、傳熱和蒸汽壓遷移方向均一致，具有干燥溫度低、干燥速度快、受熱均勻、效率高等優(yōu)點，可有效保證有效成分的含量。因此使得微波真空干燥后的指標(biāo)性成分總含量明顯高于常壓的烘箱干燥。３ 結(jié)論與討論通過試驗，建立了丹參提取物中迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ同時測定的方法。確定以乙腈（Ｂ）－０.５％甲酸水（Ａ）溶液為流動相進行梯度洗脫（０～１０ ｍｉｎ，１０％ ～２７.５％ Ｂ；１０～１５ ｍｉｎ， ２７.５％～３２％ Ｂ；１５～３５ ｍｉｎ，３２％ ～５０％ Ｂ），選擇在２７０ｎｍ出峰較多，各組分都有較好吸收的波長作為檢測波長。采用甲醇為提取溶劑、超聲提取方 法作為供試品的制備方法。特征圖譜技術(shù)是一種可以綜合評價復(fù)雜多組分化學(xué)成分樣品的質(zhì)量控制方法。試驗以迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隱丹參酮、丹參酮ⅡＡ 為特征峰對不同干燥工藝的丹參提取物進行特征圖譜研究，可看出各 干燥方法的丹參提取物的化學(xué)成分無差異，主要是 各組分在含量上的差別。通過中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)對精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗的相似度進行計算，結(jié)果表明，試驗建立的特征圖譜穩(wěn)定性和可控性良好。試驗中真空干燥、烘箱干燥、微波真空干燥的時間分別為１１５ｈ，１２６ｈ，０.６２ｈ，前兩種干燥方法的干燥時間分別是微波真空干燥的１８５倍和２０３倍。微波真空干燥的總耗電量為０.２５ｋｗ／ｈ，而真空干燥和烘箱干燥的總耗電量分別是 ２３０ｋｗ／ｈ 和２５２ｋｗ／ｈ，因此真空干燥和烘箱干燥在總耗電量方面是微波真空干燥的近１０００倍。微波真空干燥得到的干膏性狀疏松多孔，易碎成細粉，且表面大，比 烘箱干燥得到的粉體更易吸潮，應(yīng)及時密封保存。在微波干燥過程中，由于溫度梯度、傳熱和蒸汽壓遷移方向均一致，因此干燥時間短、加熱溫度低，使干膏中有效成分損失小。真空干燥雖然干燥溫度較低，但傳熱速度慢，干燥的時間長。烘箱干燥的時間長，溫度高，使干膏中的有效成分損失最大。綜合考慮，３種干燥工藝對指標(biāo)性成分含量、干燥時間、含水量、干膏性狀、干膏量、干膏收率及能耗的影響，微波真空干燥明顯優(yōu)于其他兩種干燥方法。因此，微波真空干燥是一種有效、實用、有前景的新型干燥技術(shù)，非常適合于中成藥生產(chǎn)，可以有效為復(fù)方丹參片大生產(chǎn)中的干燥工藝優(yōu)化提供參考，在工業(yè)化生產(chǎn)中具有較大的應(yīng)用價值。

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